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2023-02-032625 次瀏覽
解決方案|細(xì)胞傳代

細(xì)胞傳代

大部分來自實體組織器官的細(xì)胞是貼壁生長的,它們在機體內(nèi),也是與其他細(xì)胞或細(xì)胞外基質(zhì)結(jié)合的。

在貼壁的過程中,細(xì)胞首先分泌細(xì)胞外基質(zhì),這種細(xì)胞外基質(zhì)黏附在支持物的表面(如培養(yǎng)瓶、培養(yǎng)皿的底面)。細(xì)胞通過其表面的黏附因子與這些細(xì)胞外基質(zhì)結(jié)合。所以細(xì)胞貼壁與否與細(xì)胞本身分泌細(xì)胞外基質(zhì)的能力以及細(xì)胞本身表達的黏附分子的數(shù)量有關(guān),也與培養(yǎng)皿壁的表面結(jié)構(gòu)有關(guān)。

 

















大口無碰撞

但細(xì)胞將培養(yǎng)瓶底部占滿時,需要采用細(xì)胞消化的方法將細(xì)胞從細(xì)胞培養(yǎng)瓶上剝落,傳代轉(zhuǎn)移到其他培養(yǎng)器皿中繼續(xù)培養(yǎng),此時如何高效收獲細(xì)胞,如何提高細(xì)胞回收率成為重中之重??倱?dān)心遺漏了角角落落的細(xì)胞,或是用力過猛損害細(xì)胞健康?總是擔(dān)心刮刀蹭到瓶口導(dǎo)致污染?總是害怕移液時撞到瓶子移液不準(zhǔn)?不用擔(dān)心,耐思來助力!



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傳代密度過高

一旦細(xì)胞養(yǎng)太久至融合度過高(>90%)才傳代,容易使細(xì)胞產(chǎn)生老化現(xiàn)象,甚至是堆疊,再消化細(xì)胞時不易吹打成單顆細(xì)胞,即便再重新傳代,細(xì)胞也無法回到原本的特性。(如:單層細(xì)胞,沒長滿就發(fā)生堆疊現(xiàn)象)。

解決方案

盡量避免融合度過高,鏡下觀察融合度約達到80%即可傳代。

細(xì)胞融合度:在細(xì)胞培養(yǎng)中指的是細(xì)胞在培養(yǎng)表面(培養(yǎng)皿/瓶)所占的比例。

傳代密度過低

貼壁培養(yǎng)的細(xì)胞,若細(xì)胞培養(yǎng)到80-90%密度需要開始傳代,在傳代接種細(xì)胞密度過低,細(xì)胞間距離太遠(yuǎn),就無法在細(xì)胞間產(chǎn)生黏附及通信作用,幫助信號傳導(dǎo)并活化細(xì)胞;總體細(xì)胞量不足,分泌的生長因子濃度會不足以產(chǎn)生利于生長的微環(huán)境,以上皆會造成增殖速度遲緩或細(xì)胞死亡。

解決方案

細(xì)胞傳代時,要進行準(zhǔn)確的細(xì)胞計數(shù),確保接種的密度。

 

如何確定細(xì)胞的正確初始接種密度

美國細(xì)胞庫(ATCC)建議各類不同細(xì)胞株接種密度:


來源:

https://www.atcc.org/support/faqs/8e032/Seeding%20Density%20for%20Cell%20Lines-25.aspx