1. 什么情況下需要使用不含酚紅的GelNest?基質(zhì)膠？
對(duì)于涉及顏色檢測(cè)的實(shí)驗(yàn)，推薦使用不含酚紅的GelNest?基質(zhì)膠，如使用熒光染料對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞成管的定量；
對(duì)子宮內(nèi)膜細(xì)胞培養(yǎng)必須使用不含酚紅的GelNest?基質(zhì)膠。
不含酚紅的GelNest?基質(zhì)膠也可以應(yīng)用于一些體內(nèi)應(yīng)用研究。因酚紅與一些非甾體雌激素結(jié)構(gòu)相似，有顯著的雌激素活性，在實(shí)驗(yàn)動(dòng)物體內(nèi)可能具有干擾內(nèi)分泌與荷爾蒙代謝的能力。此外，酚紅是一種潛在的內(nèi)分泌干擾物，有可能會(huì)干擾實(shí)驗(yàn)動(dòng)物體內(nèi)激素的自然產(chǎn)生和代謝能力。
2. 高濃度GelNest?基質(zhì)膠可以用于哪些實(shí)驗(yàn)？
高濃度GelNest?基質(zhì)膠可用于3D細(xì)胞培養(yǎng)、裸鼠體內(nèi)成瘤實(shí)驗(yàn)等體內(nèi)應(yīng)用研究。高濃度GelNest?基質(zhì)膠的蛋白濃度高，和腫瘤細(xì)胞一起皮下注射到小鼠體內(nèi)后保持其完整性并保持原位，以便進(jìn)行原位分析或未來腫瘤的取樣。
3. 哪些情況下應(yīng)該選用薄膠法/厚膠法？3D細(xì)胞培養(yǎng)有哪些應(yīng)用？
薄膠法主要用于細(xì)胞貼壁和增殖，如原代細(xì)胞培養(yǎng)僅需要一層薄薄的蛋白層輔助而非蛋白基質(zhì)；
厚膠法主要用于3D細(xì)胞培養(yǎng)，成環(huán)試驗(yàn)，如大鼠主動(dòng)脈組織分化為毛細(xì)管樣結(jié)構(gòu)，以及進(jìn)行細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn)等。
3D細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)，主要是用于研究細(xì)胞與細(xì)胞間的相互作用以及復(fù)雜結(jié)構(gòu)等。
4. GelNest?基質(zhì)膠可以用于誘導(dǎo)ES/iPS細(xì)胞分化的研究嗎？
可以，實(shí)驗(yàn)表明GelNest?基質(zhì)膠可以用于ES/iPS細(xì)胞的分化研究，建議使用干細(xì)胞專用的GelNest?基質(zhì)膠。
5. 如何從GelNest?基質(zhì)膠中收獲細(xì)胞？
推薦使用中性蛋白酶，如分散酶來收獲培養(yǎng)在GelNest?基質(zhì)膠中的細(xì)胞。
中性蛋白酶相比胰蛋白酶、膠原蛋白酶或其它蛋白水解酶能夠更溫和有效地獲得單細(xì)胞懸液，不會(huì)損傷細(xì)胞或分裂細(xì)胞表面蛋白。對(duì)于需要繼續(xù)接種培養(yǎng)或生物檢測(cè)的細(xì)胞，使用中性蛋白酶不會(huì)產(chǎn)生損傷，此外中性蛋白酶也可以用于組織的分離。
也可使用相應(yīng)的細(xì)胞復(fù)蘇溶液進(jìn)行代謝實(shí)驗(yàn)和RNA回收實(shí)驗(yàn)，建議在4℃使用細(xì)胞復(fù)蘇溶液進(jìn)行非酶反應(yīng)的細(xì)胞收獲。
其它方法：降低溫度至4-6℃使基質(zhì)膠解聚，這需要一定的時(shí)間并且僅適合一部分應(yīng)用；或者離心以破壞基質(zhì)膠結(jié)構(gòu)。
6. 使用GelNest?基質(zhì)膠培養(yǎng)的細(xì)胞，如果需要進(jìn)行切片或者免疫組織化學(xué)及免疫熒光檢驗(yàn)，該怎樣固定呢？如何避免解聚？
可以使用2-4%多聚甲醛進(jìn)行固定，如2-4%多聚甲醛配制在PBS中，室溫固定20分鐘。某些情況下，在固定后可能出現(xiàn)解聚的情況，可以加入1%戊二醛(戊二醛作為固定劑，常用于電鏡檢測(cè))。
如果需要進(jìn)行免疫熒光檢驗(yàn)，加入戊二醛后，會(huì)出現(xiàn)明顯的背景熒光。為了解決這一問題，建議操作中在固定之后，使用NaBH4進(jìn)行淬滅。NaBH4極易起泡，進(jìn)行該步驟時(shí)，必須在水平操作臺(tái)上小心操作，避免晃動(dòng)，盡量減少氣泡的形成。另外，也可以嘗試使用較低濃度(如0.1%到0.5%)的戊二醛進(jìn)行固定，濃度越低，背景熒光信號(hào)越少。
7. 提取過程會(huì)引起層粘連蛋白變性嗎？
不會(huì)引起層粘連蛋白變性。
注：NEST提供的各種基質(zhì)膠應(yīng)用方案僅供參考，實(shí)際須根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康倪M(jìn)行條件的優(yōu)化。
