成人黄色电影网,一本大道色婷婷在线,成人免费一区二区三区视频,都市激情 在线 亚洲 国产

購物車(
清空購物車
2024-02-0225774 次瀏覽
你的細(xì)胞如何安全度過春節(jié)長假?

春節(jié)假期將至,對于科研人來說這可是又愛又恨:一個假期回來,原本生龍活虎的細(xì)胞瞬間“暴斃”。

 

那么導(dǎo)致這種情況的原因有哪些?

節(jié)前養(yǎng)細(xì)胞過程該注意什么?

NEST幫你劃重點(diǎn)!

幫細(xì)胞崽崽過龍年!


 

01細(xì)胞前期準(zhǔn)備

細(xì)胞培養(yǎng)體系中最為重要的即為細(xì)胞培養(yǎng)基。常見的細(xì)胞培養(yǎng)方法便是90%基礎(chǔ)培養(yǎng)基(DMEM、1640、F12等)+10%胎牛血清。

盡管使用廣泛,但胎牛血清在細(xì)胞培養(yǎng)中面臨著諸多問題和風(fēng)險(xiǎn)。有研究發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)基支原體污染中的牛萊氏無膽甾原體和精氨酸支原體來源于牛血清。

 

因此,胎牛血清的品質(zhì)至關(guān)重要。

NEST選用南美烏拉圭血源,每一批血清的生產(chǎn)都受到嚴(yán)格的控制,從血清的收集和整個處理和生產(chǎn)的所有階段,按照符合歐洲法規(guī)進(jìn)行處理,一直到最終包裝做到全程的質(zhì)量控制。



NEST胎牛血清血源地證明

NEST胎牛血清無疫病證明

NEST胎牛血清官方原產(chǎn)地證明

 

此外,NEST每一批血清都會進(jìn)行完善的檢測。

1. 支原體:每產(chǎn)品批次都要檢測有無支原體。通過培養(yǎng)方法檢測血清是否存在支原體。

2. 無菌性:產(chǎn)品均基于歐洲藥典或美國藥典進(jìn)行無菌性檢測,確保無細(xì)菌、酵母、大腸桿菌噬菌體等。無菌過濾、無菌分裝,每生產(chǎn)批次中均會抽樣進(jìn)行無菌測試。

3. 血紅蛋白:血紅蛋白具有氧化性,過高會導(dǎo)致細(xì)胞受損。采用分光光度計(jì)測量殘留血紅蛋白水平。

4. 細(xì)胞培養(yǎng)試驗(yàn):每批胎牛血清都被測試特定細(xì)胞系的體外培養(yǎng)效果。從細(xì)胞生長、鋪板效率、克隆效率三方面評判。測試細(xì)胞種類:HeLa,L929,SP2/0-AG14MRC-5

 

 

選用指南

 

 

 

 

02細(xì)胞凍存操作

細(xì)胞凍存是將細(xì)胞放在低溫環(huán)境,減少細(xì)胞代謝,以便長期儲存的一種技術(shù)。

凍存管一般用作低溫儲存,是常用的實(shí)驗(yàn)耗材,多用于生物、醫(yī)藥、食品等行業(yè)。采用醫(yī)用聚丙烯(PP)為原料,在液氮?dú)庀嗟某蜏丨h(huán)境下,可耐低溫至零下196℃。

 

耐思凍存管分常規(guī)無碼凍存管、二維碼凍存管和三碼合一SBS凍存管三種系列,具備完整的穩(wěn)定性與安全性驗(yàn)證報(bào)告。

 

 

細(xì)胞在不加任何保護(hù)劑的情況下冷凍,細(xì)胞內(nèi)外的水分會很快形成冰晶從而引發(fā)一系列的不良反應(yīng)

因此,細(xì)胞凍存液至關(guān)重要。

 

 

NEST細(xì)胞凍存液改良優(yōu)勢

 

 

選用指南

 

 

細(xì)胞凍存操作指南(排版的時候使用上下滑動查看文字的模板)

1. 貼壁細(xì)胞制備細(xì)胞懸液:(懸浮細(xì)胞請忽略此步驟)

(1) 將舊培養(yǎng)基吸除,PBS清洗兩遍。

(2) 在培養(yǎng)瓶中加入少許胰酶,以能覆滿瓶底為限。將培養(yǎng)瓶平置于培養(yǎng)箱中消化約1~2分鐘,期間在顯微鏡下觀察,一旦發(fā)現(xiàn)細(xì)胞間隙增大、細(xì)胞變圓、比較松動后,立即終止消化(個別難消化細(xì)胞需要延長消化時間,但要避免消化過度)。

(3) 加入適量溫浴好的完全培養(yǎng)基終止消化,輕輕吹打均勻細(xì)胞。

 

2. 貼壁細(xì)胞和懸浮細(xì)胞的凍存:

(1) 取少量細(xì)胞懸液細(xì)胞計(jì)數(shù),算出細(xì)胞總數(shù)和所需細(xì)胞凍存液的量。細(xì)胞的凍存密度以1×10^6~2×10^7 cells/ mL為宜。

(2) 將所需量的細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至適當(dāng)離心管中,200~500×g,離心3-5分鐘, 棄上清收集細(xì)胞。(離心速度和時間取決于細(xì)胞類型)

(3) 向細(xì)胞沉淀中加入適量無血清非程序細(xì)胞凍存液,用移液器輕輕吹打以重懸細(xì)胞,分裝于無菌細(xì)胞凍存管中,嚴(yán)密封口后,注明細(xì)胞名稱、代數(shù)、日期。

(4) 直接置于-80℃冰箱中儲存,細(xì)胞可至少保存一年;或者-80℃過夜后,次日將細(xì)胞投入液氮中長期儲存。

 

 

 

 

03細(xì)胞復(fù)蘇操作

1. 自液氮罐或-80℃冰箱中取出凍存管,檢查蓋子是否旋緊,立即放入37℃水浴中快速解凍。(避免冰晶重新結(jié)晶而造成細(xì)胞死亡),輕搖凍存管使其在1~2分鐘內(nèi)全部融化,75%酒精擦拭凍存管外部,移入無菌操作臺內(nèi)。

2. 將解凍的細(xì)胞懸液移至15mL無菌離心管中,再加入5~10mL預(yù)熱好的完全培養(yǎng)基,輕輕混合均勻,200~500×g,離心3-5分鐘,棄上清收集細(xì)胞。(離心速度和時間取決于細(xì)胞類型)

3. 加入預(yù)熱好的完全培養(yǎng)基,混合均勻,轉(zhuǎn)移到細(xì)胞培養(yǎng)皿或培養(yǎng)瓶中,置于細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

 


注:可使用耐思新推出細(xì)胞復(fù)蘇儀替代原始細(xì)胞復(fù)蘇過程,預(yù)熱1分鐘,催融階段110秒左右,解凍復(fù)蘇階段大約120秒左右,解凍復(fù)蘇細(xì)胞存活率高。