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2023-09-1521135 次瀏覽
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腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移主要包括以下5個(gè)過(guò)程:

原位侵襲(Local invasion),

腫瘤細(xì)胞內(nèi)滲(Intravasation)

循環(huán)系統(tǒng)存活(Survival in the circulation),

腫瘤細(xì)胞外滲(Extravasation),

形成轉(zhuǎn)移灶(Micrometastasis formation)等。


其中細(xì)胞侵襲發(fā)生在第一步,即腫瘤細(xì)胞在原位突破基底膜,然后內(nèi)滲進(jìn)入血管、淋巴管的過(guò)程。其侵襲性是腫瘤相關(guān)信號(hào)通路、藥物治療、靶向治療、致癌/抑癌基因等腫瘤學(xué)研究的一個(gè)重要指標(biāo)。


(腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移過(guò)程,來(lái)源DOI:10.1016/j.cell.2011.09.024)


腫瘤細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn)通常利用細(xì)胞小室(常用6孔、12孔、24孔板等)進(jìn)行檢測(cè)。


與腫瘤細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)不同的是,需在聚碳酸酯膜上側(cè)鋪一層基質(zhì)膠,用以模仿細(xì)胞外基質(zhì)。

腫瘤細(xì)胞必須分泌基質(zhì)金屬蛋白酶(MMPs)消化基質(zhì)才能進(jìn)入下室,更好的模擬了動(dòng)物體內(nèi)的情況。


侵襲實(shí)驗(yàn)過(guò)程

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a. 基質(zhì)膠包被:

(a) 將基質(zhì)膠置于冰中并在4℃融化,使用預(yù)冷的移液管或吸頭混合基質(zhì)膠至均勻狀態(tài)。
(b) 在冰上,將基質(zhì)膠用無(wú)血清培養(yǎng)液按照1:8的比例進(jìn)行稀釋?zhuān)缛?μl基質(zhì)膠加入64μl不含血清的培養(yǎng)液中,使用預(yù)冷的吸頭混合至均勻狀態(tài)。

注:常用的稀釋比例為1:4、1:6、1:8,可根據(jù)實(shí)驗(yàn)具體情況調(diào)整稀釋比例。
(c) 取60μL上述混合溶液垂直加入細(xì)胞小室中,使其均勻平鋪在底部。

(d) 吸出未結(jié)合的基質(zhì)膠。

(e) 加入100μl不含血清的培養(yǎng)液,將培養(yǎng)板置于37℃培養(yǎng)箱孵育30分鐘,進(jìn)行水化。
(f) 去除小室中液體,檢查是否有液體穿過(guò)小室進(jìn)入到下室中,若沒(méi)有,則可用于接種細(xì)胞。


b. 細(xì)胞懸液的制備:
(a) 對(duì)細(xì)胞進(jìn)行12-24小時(shí)的饑餓處理。(非必需步驟)
(b) 消化細(xì)胞,用不含血清的培養(yǎng)液重懸,調(diào)整細(xì)胞密度為5-50萬(wàn)個(gè)/mL。


c. 細(xì)胞接種:
(a) 取500μL含10% FBS的培養(yǎng)液加入24孔板下室,用鑷子將細(xì)胞小室置于24孔板內(nèi)。

(b) 取200μL細(xì)胞懸液加入細(xì)胞小室。
(c) 將24孔板置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24-48小時(shí)。


d. 細(xì)胞固定、染色:
(a) 取出細(xì)胞小室,去除培養(yǎng)液,用棉簽輕輕擦拭基質(zhì)膠及細(xì)胞。
(b) 在24孔板干凈的孔中加入600μl 4%多聚甲醛固定液,將小室放入固定20-30分鐘。
(c) 棄固定液,PBS洗滌小室1次。

(d) 在24孔板干凈的孔中加入適量結(jié)晶紫染色液,將小室放入染色5-10分鐘。
(e) 取出小室,PBS洗滌3次。

(f) 適當(dāng)風(fēng)干后,顯微鏡下觀察并計(jì)數(shù)。


除細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn)外,基質(zhì)膠可被用于類(lèi)器官培養(yǎng)、干細(xì)胞分化、血管生成、體內(nèi)腫瘤發(fā)生等多項(xiàng)研究。