你只知道ELISA?
在生命科學(xué)領(lǐng)域多種情況下,及時、高效、經(jīng)濟地測定和量化樣品中存在的抗原或抗體是至關(guān)重要的環(huán)節(jié)。
酶聯(lián)免疫吸附實驗(ELISA)已被證明是非常寶貴的研究和診斷工具, 通過將已知的抗原或抗體吸附在固相載體表面,使酶(主要是HRP)標(biāo)記的抗原抗體反應(yīng)在固相表面,從而測量生物樣品中的抗體或抗原。
ELISA原理示意圖
傳統(tǒng)ELISA避免了同位素的使用,消除了安全性的隱患,但外部條件對溶液顏色變化的影響巨大且OD值有效的線性范圍過低,ELISA檢測的靈敏度和動態(tài)范圍大大受制于光吸收技術(shù)的缺陷。
1982年Halonen等人在J Clin Microbiol雜志上發(fā)表了題為” Time-resolved fluoroimmunoassay: a new test for rubella antibodies” 的文章,標(biāo)志著免疫檢測正式跨入熒光時代,這也是DELFIA技術(shù)的原型。
簡單來說,DELFIA相比傳統(tǒng)ELISA實驗有兩個區(qū)別:
1. 檢測抗體上的酶HRP換成鑭系螯合物((Eu, Sm, Tb, Dy)標(biāo)記。
2. 檢測方式為熒光檢測。
DELFIA原理示意圖
DELFIA中用到的鑭系元素是一類特殊的具有熒光性質(zhì)的元素,這對實驗材料——酶標(biāo)板提出了要求。
絕大多數(shù)ELISA都選擇透明酶標(biāo)板作為作為載體和容器,但發(fā)光反應(yīng)中發(fā)射出的光是各向同性的,光不僅會從垂直方向發(fā)散,還從水平方向發(fā)散出來,很容易的就會通過透明酶標(biāo)板各個孔之間的間隙和孔壁。相鄰孔之間相互影響,造成結(jié)果失誤。
白色的酶標(biāo)板可用于較弱的光檢測,常用于一般的化學(xué)發(fā)光和底物顯色(如雙熒光素酶報告基因分析)。
黑色的酶標(biāo)板因其自身會有光吸收,其信號要弱于白色的酶標(biāo)板,一般用于檢測較強的光,如熒光檢測。
? 高結(jié)合力
耐思黑色酶標(biāo)板由非自熒光材料制成,表面經(jīng)處理后,其蛋白結(jié)合能力大大增強,可達500ng IgG/cm2,主要結(jié)合的蛋白分子量>10kD。
? 背景熒光低,可消除非特異反應(yīng)帶來的問題。
黑色的酶標(biāo)板因其自身會有光吸收,可排除一些較弱的背景干擾熒光。
? 可拆式設(shè)計
白色酶標(biāo)板框搭配黑色酶標(biāo)板條的可拆式設(shè)計更便于操作。
當(dāng)需要將板條拆下時,可從板條正面兩端輕輕向上掰動,然后摳取下來,如上圖所示。
若板條太緊難以掰動,可用手指抵住板條底部輕輕向上頂,然后如上圖將板條摳取下來。
務(wù)必要戴好無塵手套,以免污染板條而影響板條的透光性。
不可從板條的一端強行掰取,容易造成板條斷裂。
在裝板條時,要注意方向,板條兩端分別設(shè)計成方形和半圓形,半圓形那端必須裝在有凸起臺階的卡槽內(nèi)(箭頭所在處),切勿裝反。
將板條裝入板框后,在兩側(cè)和中間部位都需要進行按壓,壓實后方可進行后續(xù)實驗。
ELISA·DELFIA